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本试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白与浆蛋白的方法。约90分钟就可以完成培养细胞的核蛋白与浆蛋白的分离。抽提得到的蛋白为非变性、有活性的，可以用于Western、EMSA、footprinting、报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。

通过CER A和CER B在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀后破坏细胞膜，释放出浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过高盐的NER抽提得到核蛋白。

组分	规格
CER A	15mL
CER B	0.5mL
NER	2.5mL
说明书	1份

保存：-20℃。


对于细胞样品，本试剂盒可以抽提50个，数量为2×10⁶个Hela细胞(约40mg)的样品；
对于组织样品，如果每个样品的重量不超过30mg，本试剂盒可以抽提50个样品，如果每个样品约为30～60mg，本试剂盒大约可以抽提37个样品。可根据需要按比例放大或缩小提取规模。

• 需自备PMSF，PMSF一定要在抽提试剂加入到样品前2～3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。
  
• 抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。所用试剂都需要预冷或者即融，保证操作过程中的低温环境。
  
• 对于组织样品，本试剂盒仅适合于新鲜组织，对冻存过的组织抽提效果较差。可以抽提的组织样品数通常不足50个。
  
• 使用本试剂盒抽提得到的细胞核蛋白与细胞浆蛋白都可以直接用BCA蛋白定量试剂盒(货号：LA10948)测定蛋白浓度。但不适合用Bradford法测定蛋白浓度。
  
• 为了您的安全和健康，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。

准备溶液：室温融解试剂盒中的三种试剂，溶解后立即放置在冰上，混匀。取适量的CERA和NER备用，分别在需要加入前数分钟内加入PMSF至终浓度为1mM。如果目标蛋白含丰富的半胱氨酸，可在CER A、NER中加入DTT至终浓度0.5mM。

• 对于贴壁细胞：用PBS洗一遍，用细胞刮刀刮下细胞，或用EDTA溶液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打细胞(尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白)。500g离心2～3分钟，尽可能吸弃上清，留下细胞沉淀备用。接步骤4。
  
• 对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，500g离心2～3分钟，尽可能吸弃上清，留下细胞沉淀备用。接步骤4。
  
• 对于新鲜组织：
  方法1：把组织尽可能切成非常细小的碎片。在PBS里面匀浆制成细胞悬液，500g离心2～3分钟，弃上清，估计细胞沉淀体积，接步骤4。
  方法2：把组织称重后，把组织尽可能切成非常细小的碎片，按照每50mg组织加入500μL的比例加入CER A，匀浆后把匀浆液转移到塑料离心管内，接步骤5。(在步骤7按照每200μL CER A加10μL比例加入CER B)
  
• 每20μL细胞沉淀加入200μL添加了PMSF的CER A。(对于2×10⁶个Hela细胞，其细胞沉淀的体积大约为20μL或40mg)
  
• 最高速剧烈Vortex 5秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。(如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开，可以适当延长Vortex时间)
  
• 冰浴10～15分钟。
  
• 加入CER B 10μL。最高速剧烈Vortex 5秒，冰浴1分钟。
  
• 最高速剧烈Vortex 5秒，4℃ 14000～16000g离心5分钟。
  
• 立即吸取上清至一预冷的离心管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用，也可以-70℃冻存。(千万不要触及沉淀，可在沉淀上方保留极小体积的上清，以免触及沉淀)
  
• 对于沉淀，完全吸尽残余的上清，加入50μL添加了PMSF的NER。(不吸尽上清会污染有细胞浆蛋白)
  
• 最高速剧烈Vortex 15～30秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。然后放回冰浴中，每隔1～2分钟再高速剧烈Vortex 15～30秒，共30分钟。
  
• 4℃ 14000～16000g离心10分钟。
  
• 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用，也可以-70℃冻存。

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